聚合酶連鎖反應(PCR)幾乎是分子生物學中最普遍的技術，PCR主要是三個循環步驟，包括了DNA變性、黏合以及延長，擴增特定序列的DNA片段。接著陸續發展出許多以PCR為基礎，廣泛用於人類的疾病及其他動植物病蟲害等的檢測儀器，其中較常見的有：即時聚合酶連鎖反應(Real-time PCR)、聚合酶連鎖反應-限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)、聚合酶連鎖反應(Nested PCR)及多重聚合酶連鎖反應(Multiplex PCR)等。而其中又以Real-time PCR被使用最多，除了縮短反應時間外，隨著技術的更新，更能達到高效率、準確及靈敏度等優點[1]。
Real-time PCR又稱Quantitative real time polymerase chain reaction (簡稱RT-PCR或qPCR)，其概念為在DNA擴增反應中，加入特定螢光染劑，推算聚合酶連鎖反應(PCR)後的產物總量[2]。
依其標定螢光物又分成非專一性化學標定(SYBR Green )與專一性化學標定(TaqMan probe)[3]。
第一種為非專一性化學標定(SYBR Green I )：
SYBR Green I 螢光染劑會與雙股DNA的minor groove結合，崁入DNA中，因此PCR的過程中，在每個循環結束時偵測螢光強弱，就能推算出有多少PCR的產物，但因為是非專一性的結合，所以SYBR Green I除了結合到目標產物上，同時也會結合到其他的DNA中，因此這可說是SYBR Green I 的缺點之一[3]。
圖一、SYBR Green I偵測系統
第二種為TaqMan probe (hydrolysis probe)
透過人工合成的TaqMan probe (oligonucleotid)，在oligonucleotid兩端分別標定上不同螢光物質，而這兩螢光物質彼此間距離太近時會遮蔽掉彼此的螢光，因此無法偵測到螢光，但是當DNA進行複製時，oligonucleotid會被切割水解，讓兩個螢光物質分開，因此能偵測到螢光，螢光越強代表PCR產物越多。其中使用的probe是特異性與Taq結合，因此不會偵測到非特異性的反應，這也是TaqMan probe的優點[3]。
圖二、TaqMan probe偵測系統
而另一種PCR，逆轉錄PCR (reverse transcription-PCR)也簡稱為RT-PCR，是聚合酶鏈式反應(PCR)的一種應用，主要用於RNA的複製。在RT-PCR過程中，RNA先被逆轉錄成爲互補的DNA (cDNA)，再以此爲模板透進行PCR反應，大量複製DNA。
RT-PCR在臨床上可應用於基因診斷、傳染病檢測、病毒分型、微生物檢測以及SNP的檢測等，應用範圍很廣，隨著科技的日新月異，RT-PCR相關儀器將會發展更多元，讓靈敏度、準確率以及成本都達到最佳化，造福更多的社會大眾。
參考資料
Edited by A-Kai
- http://www.bio-protech.com.tw/databank/DataSheet/Machine/Real-time%20PCR%E6%A6%82%E8%AB%96.pdf
- https://zh.wikipedia.org/wiki/%E5%8D%B3%E6%99%82%E8%81%9A%E5%90%88%E9%85%B6%E9%8F%88%E5%BC%8F%E5%8F%8D%E6%87%89
- http://yourgene.pixnet.net/blog/post/88168005-q-pcr%28real-time-pcr%29
留言列表
基因叔叔講期刊給你聽 (7)
