圖片1.jpg

    生物標記包含DNARNA以及蛋白質,可用於分析細胞的功能、臨床疾病診斷並且幫助醫生選擇治療方式。其中,用以評估個體動態基因表達的改變,RNA為最理想的指標[1]

    在檢測技術日新月異,過去原位RNA檢測技術(ISHFISH)已發展多年,但這些技術在特殊檢體上還是有許多的局限存在。例如它們缺乏可靠性和靈敏度,用以準確地檢測大多數人類基因的表達。此外,微陣列(Microarray)PCR技術是常用於分子診斷分析的標準分子檢測方法,但是在這些技術最大的問題就在於只能偵測含量多寡,但無法偵測整體細胞或組織的臨床信息以及表達分佈情形。

    為解決這些問題,ACD (Advanced Cell Diagnostics Inc., Hayward, CA)開發了RNAscope®  in situ hybridization (ISH),透過獨特探針放大信號新型核酸原位雜交染色技術,可以取代傳統ISH/FISH RNA原位檢測 [2],此技術幾乎能夠設計出所有物種的目標探針並且提供性能的保證,而其探針製造只需要兩週以內的時間,比起全新抗體製造,所需要的時間少了很多,另外,透過Z探針設計,RNAscope® ISH能夠放大訊號提高偵測靈敏度並且降低來自非特異性雜交的背景干擾[1]

RNAscope® ISH的操作原理及步驟如下[2]

1、透化

利用RNAscope® ISH試劑盒中的kit預先處理載玻片上已固定好的細胞或組織檢體,使其暴露出目標RNA,以利探針辨識。

圖片2.jpg

2、探針雜交

RNAscope® ISH設計Z探針目標探針,能與目標RNA做雜交反應。

圖片3.jpg

3、信號放大

通過信號擴增序列與顯色探針(Label Probe)標記,相互反應並互補結合進而擴大偵測信號,提高偵測靈敏度

圖片4.jpg

4、影像顯影

透過光學顯微鏡或多光譜成像系統的偵測下,呈現不同細胞中每一個目標RNA分子的訊號,一個目標RNA呈現一個點狀信號。

圖片5.jpg

5、量化分析

在顯微鏡下直接量化計數或使用專門量化軟體RNAscope® SpotStudio™或HALO自動化圖像分析,量化每一個細胞中的RNA分子信號。

利用RNAscope®得到的染色結果

圖片6.jpg

圖一、視覺化並量化多個檢查點和免疫細胞標記物的表達

圖片7.jpg

圖二、可用於評估藥物安全性,藥物與基因表達間的關聯性

圖片8.jpg

圖三、RNAscope® ISH合併IHC在人類肺癌的染色結果,PPIB陽性對照mRNA(探針紅色)CAM5.2酸性細胞角蛋白(綠色螢光)DAPI作為對比染色(藍色螢光)

圖片9.jpg

圖四、在著名的國際期刊Nature Communications中,利用RNAscope® ISH的染色結果

統整RNAscope®的優點[3]

1.應用性廣泛

可應用於各個領域的實驗,並供超過15000萬種以上的探針選擇(包含140種物種以上)

2.同一檢體中偵測多種目標RNA

透過不同設計的探針,同時偵測不同目標基因的表現及其之間的關聯性

3.高靈敏度及特異性

獨家專利設計的Z探針設計,搭配放大訊號系統,增加靈敏度特異性

4.不需要RNase-free的操作環境與過程

IHC實驗流程類似並且可以合併使用,同時偵測目標RNA蛋白質間的變化情形

5.任何基因及組織都適用

只需要兩週的時間,即可得到客製化的探針,不用像全新抗體需要攏長的製備時間

    RNAscope® ISH的特色以靈敏度特異性而聞名,目前已成為一項經過驗證的技術,在超過850多個研究文獻中被使用。ACD提供全面的藥物檢測服務和相關產品,能檢測140多種物種,並且超過15,000種目標分子的檢測試劑、附件和目錄探針。

    RNAscope®ISM可以檢測幾乎所有RNA分子生物標誌物,具有單分子靈敏度和組織特異性。它提供了一種通用的解決方案,以高度特異和敏感的方式分析藥物靶標和生物標記物的組織分佈,而無需耗時的抗體開發和驗證,提供一個快速及簡便的RNA原位偵測方式。

 

參考文獻:

1. Advanced Cell Diagnostics, Inc. https://acdbio.com

2. 北京友誼中聯生物科技有限公司http://t.cn/E2ScZFx

3. 弘晉有限公司http://t.cn/E2Sts4y

 

基因叔叔 發表在 痞客邦 留言(1) 人氣()