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Mutation of p53 Gene and Its Correlation with the Clinical Outcome in Dogs with Lymphoma

J Vet Intern Med 2016;30:223–229

    淋巴瘤在寵物犬為最常見的造血系統相關腫瘤,根據報導每年的發生率約為100,000隻犬中就有13-107隻被診斷出淋巴癌[1,2]。在臨床,針對犬隻的淋巴癌已發展出許多的化療療程,而多種化療藥物合併使用在犬隻上約佔80-90%,但大多數的犬隻最後都因腫瘤產生抗藥性復發,進而導致犬隻死亡或無法治療而進行安樂死,因此為了改善犬隻淋巴癌治療效果,探討抗藥性與腫瘤間的關係是必要的。

    過去文獻中發現,在小鼠實驗中p53失去功能與腫瘤產生抗藥性有關,另外,p53的突變與犬隻產生甲狀腺癌、口腔乳頭狀瘤、骨肉瘤、腺瘤、淋巴瘤等等都有正相關[3]

    在本篇實驗中,為了檢測大量臨床檢體,PCR-SSCP分析被應用於篩檢p53突變與否,提供一個高靈敏精確的篩選方式,其方法主要是先透過PCR放大目標基因後,分開雙股DNA變成單股後,再透過非變性的方式進行電泳,讓單股DNA因序列自然形成立體構型,假若DNA有突變,則會產生不同的3D結構,因此在電泳的過程中會有不同的移動率,進而能分別出p53是否產生突變。此實驗目的為,透過PCR-SSCP篩檢p53突變情形,並分析p53突變與犬隻淋巴瘤藥物反應率的關係及其預後。

    實驗在東京大學獸醫醫療中心進行,並募集43隻患有高度惡性淋巴癌的犬隻,這些犬隻主要是透過細針穿刺的方式取得檢體,並且透過組織學進行病理診斷,檢測治療前p53突變狀況,再進行治療,最後評估p53突變臨床藥物反應率預後存活時間之間的關係。

    首先以PCR放大p53的exon 4、5、6、7及8後(表一),進行SSCP分析,從結果中得知,在43隻犬隻中有7隻具有p53突變(16%),有36隻沒有突變(84%)。

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表一、PCR設計的引子序列

    7個突變檢體的電泳結果如圖一 (A, exon4; B, exon5; C, exon6; D, exon7; E, exon8),進一步將這些突變的位點進行定序,進一步推得其胺基酸改變的情形(表二)。

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圖一、SSCP的結果圖

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表二、進一步分析其改變的胺基酸序列

    進一步將犬隻分成p53突變未突變組,分析其對藥物的反應率及預後存活時間,從結果中可以得知p53突變的犬隻,其對藥物反應率較差(表三),並且預後存活時間也較短(圖二)。

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圖二、p53突變與藥物反應率的關係

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圖三、p53突變與預後存活時間的關係

    因此從此實驗當中證實,p53突變的淋巴癌犬隻有較差的治療效果及預後,因此可以透過PCR-SSCP的方式檢測犬隻在治療前p53的突變狀況,提供醫師更多的參考資料,做為治療及預後的評估,也讓飼養者有更早的準備及選擇。

 

參考資料:

1. Vonderhaar MA, Morrison WB. Lymphosarcoma. In: Carroll CC, ed. Cancer in Dogs and Cats: Medical and Surgical Management, 1st ed. Maryland: Williams and Willkins; 1998:667–695.

2. Dobson JM, Samuel S, Milstein H, et al. Canine neoplasia in the UK: Estimates of incidence rates from a population of insured dogs. J Small Anim Pract 2002;43:240–246.

3. Tomiyasu H, Goto-Koshino Y, Takahashi M, et al. Quantitative analysis of mRNA for 10 different drug resistance factors in dogs with lymphoma. J Vet Med Sci 2010;72:1165–1172.

 

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