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    血管內皮細胞生長因子(VEGF)為近年發現一種與血管新生相關的多肽生長因子,能夠專一性及高效率促進血管內皮細胞的增生[1]。在本文章中將介紹VEGF常見的檢測方式

    VEGF的檢測方式有很多種,檢測VEGF含量的技術包含:免疫組織染色、放射免疫分析、西方墨點法以及ELISA分析。

免疫組織染色法 (Immunohistochemistry, IHC)

    透過抗體辨識抗原進行專一性結合反應,偵測細胞組織中是否有特定目標抗原的存在,並進一步分析其分佈及相對表現量,能夠用於偵測蛋白、核酸、多糖等[2]

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圖一、IHC簡單的操作過程及結果

放射免疫分析 (Radioimmunoassay, RIA)

    RIA為透過放射線同位素標定的抗原未標定的抗原(標準品抗原待測抗原),同時與數量有限的特異性抗體競爭結合(競爭抗原抗體結合反應),因此可以透過結合到抗體上的同位素標定抗原的多寡,反推待測抗原的數量[3]

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圖二、RIA簡單的操作過程

西方墨點法 (Western blot)

    利用特定聚丙烯醯胺凝膠電泳區分蛋白大小後,再透過特定抗體專一性結合其抗原蛋白進行呈色,分析分子大小及呈色結果,可以得到蛋白的相對定量[4]

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圖三、西方墨點法的原理及結果

酵素結合免疫吸附分析法 (Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)

    ELISA主要利用抗體間的特異性結合,進行檢體的檢測,其反應主要結合於固體承載物上(大多為塑膠孔盤),接著再進行酵素呈色系統標準曲線來分析特定抗體或抗原的含量ELISA根據不同的檢測對象及目的可分為主要三種檢測方式:三明治法sandwich)、間接法indirect)、以及競爭法Competitive[5]

---三明治法常用於檢測大分子抗原(如:VEGF)

---間接法常用於檢測抗體

---競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制(用於檢測小分子)

三明治法簡單介紹其原理及操作:

    將具有專一性的VEGF抗體固著於塑膠孔盤上,接著再將多餘的抗體洗去,接著個別加入序列稀釋後的待測物及已知濃度的標準品(做標準曲線),待抗體與抗原進行專一性反應後洗去多餘檢體,再加入另一種專一性VEGF的抗體,反應後洗去多餘抗體,接著再加入帶有酵素二級抗體,最後再透過酵素呈色。將得到的檢體吸光值帶入標準曲線後即可推算出檢體中的VEGF含量

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圖四、ELISA簡單的操作過程及結果

    以上為VEGF的檢測方法,其中又以ELISA最為常用,其優點為快速、簡便、靈敏度高,於臨床上能快速診斷,另外也有自動化的儀器,增加在臨床的應用性。

參考資料:

1. http://www.maydeal.com/books/PptDownLoad-84630-5558.html

2. 免疫組織化學 (維基百科) https://goo.gl/OUx4p9

3. 放射免疫分析 (維基百科) https://goo.gl/8Btp2E

4. 西方墨點法 (維基百科) https://goo.gl/P4GgZQ

5. 酵素結合免疫吸附分析法 (維基百科) https://goo.gl/xubrci

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