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   上述文章中提到,核酸萃取的方式有許多種,包括管柱萃取純化法(Column Purification)試劑萃取純化法(有機溶劑萃取法與非有機溶劑萃取法)以及磁珠萃取純化法等。在本篇文章主要介紹管柱萃取純化法

    管柱萃取純化法具有操作簡單回收率高性能穩定的特點[1]。而目前大多數的實驗室及檢驗單位,在檢體量不多的情況下,多以管柱萃取純化法純化核酸,其利用濾膜作為核酸的特異性吸附材料,濾膜上含有,能透過鹽類及pH值來調整對核酸的吸附能力(圖一),但對其他物質,如:蛋白質、離子、鹽類並不會吸附,因此能夠有效回收並純化樣品中的DNA/RNA[1]。以目前最常見的spin column為例,其分成集液管、Column、墊片及濾膜等(圖二) [1]

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圖一、管柱上的矽-用於核酸吸附

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圖二、spin column主要四個部分:集液管、Column、墊片及濾膜

    管柱萃取純化法其原理與磁珠核酸萃取類似,都是以鹽類及pH值來控制矽對核酸的吸附能力,只差在一個用磁珠,一個用濾膜

管柱萃取純化法其操作步驟主要如下(圖三)[2]

1. 先以陰離子性清潔劑將細胞溶解

2. 加入試劑使蛋白變性及抑制DNase的活性

3. 接著加入蛋白分解酶K(Proteinase K),分解細胞內及DNA上的蛋白質(histone),增加回收率

4. 將以上混合物加入Column當中,DNA會吸附於濾膜上

5. 接著透過wash buffer、乙醇將DNA以外的雜質清洗乾淨

6. 最後再以elute bufferDNA從濾膜上離開,並收集DNA

    管柱萃取純化法的應用能用於RNA分離、質體分離、PCR模板準備、PCR純化及病毒核酸分離,只要是核酸相關都能純化,也是目前最廣泛使用的萃取方式,而目前根據不同的需求,更發展出不同的純化規格與特殊需求,而濾膜也不完全再是以矽為主的材料,在未來或許會有更創新與突破的地方,讓核酸萃取的技術更簡單且自動化。

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圖三、spin column可應用於 RNA分離、質體分離、PCR模板準備、PCR純化及病毒核酸分離

Edited by A-Kai

參考資料:

1. https://baike.baidu.com/item/%E6%A0%B8%E9%85%B8%E7%BA%AF%E5%8C%96%E6%9F%B1

2. http://web.ncyu.edu.tw/~hagkuo/marcon98/%E6%A0%B8%E9%85%B8%E8%90%83%E5%8F%96.pdf

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