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    以往在定量PCR產物時,常遇到的一個問題,就是所謂的定量,到底是相對定量?還是絕對定量?以往的技術大多是相對性的定量,而近期隨著科學進展,發展出第三代DNA定量技術---數字PCR(digital PCR, dPCR) [1]

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圖一、不同DNA定量技術

    定量PCR (qPCR)dPCR的基本技術相似,其目的都是測定樣品中的核酸含量,但dPCR更能精確地測定樣品中核酸的DNA分子個數(絕對定量)

    dPCR的概念為,將一個樣本分成幾十到百萬份,分配到不同的反應單元中,每一個單元至多包含一個標的分子(DNA模板),接著在每個反應單元中,分別對標的分子進行PCR擴增,最後再以螢光訊號進行統計分析,因此可以偵測樣品的絕對DNA分子個數,而不再是相對性的定量。

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圖二、dPCR的概念與簡單流程

    而其中微滴式數字PCR (Droplet Digital PCR, ddPCR)是將樣品分成數分後,在納升(nL)的乳化微滴中,以熱迴圈儀進行PCR反應,最後再以微滴分析儀逐個分析每個樣品中各液滴的螢光量並做絕對定量

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 圖三、ddPCR的概念與簡單流程

QX200系統為例,ddPCR的應用可用於[2]

癌症生物標誌研究拷貝數變異分析:以卓越的靈敏度和解析能力測量癌症突變的變異程度、檢測稀有的 DNA 靶拷貝以及解析拷貝數變異狀態。

病原體檢測:採用極為精確的QX200系統對靶DNARNA分子中的細微變化進行定量分析,從而檢測和監測病原體。

新一代測序:無需使用標準曲線,直接對NGS庫執行絕對定量分析。

基因表達分析:對少量mRNAmiRNA的細微變化進行可靠和可重複的檢測。

環境監測:使用QX200系統可測試多種環境樣品,例如土壤和水。

食品檢測:採用經過驗證的ddPCR方法對轉基因生物體進行評估。

     因此,新一代的DNA定量技術,在未來將能應用在更多的領域,讓科學更有突破性的發展,解決目前遇到的瓶頸限制,帶動科技的進步。

 

Edited by A-Kai

參考資料:

1. http://ppt.cc/dUtyz

2. http://ppt.cc/B3lGi

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